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Tris 或三(羥甲基)氨基甲烷,已被廣泛用作生物介質(zhì)中的pH緩沖液大約35年。這種生物緩沖液的近乎理想的特性是其受歡迎的原因。Tris不吸水,易溶于水,純度高。它不會(huì)沉淀鈣鹽,在室溫下在溶液中穩(wěn)定數(shù)月,并且似乎不會(huì)抑制許多酶系統(tǒng)。但是,Tris 緩沖液的化學(xué)和物理特性,使用不當(dāng)可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的pH測(cè)量的電極系統(tǒng)。
TRIS緩沖液中pH對(duì)電極的影響
生物化學(xué)家使用TRIS緩沖液將pH值控制在生理范圍內(nèi)(約7至8pH值),因?yàn)榱姿猁}會(huì)導(dǎo)致與測(cè)試樣品中的生物物質(zhì)發(fā)生不良反應(yīng)。然而,當(dāng)要對(duì)這些溶液進(jìn)行pH測(cè)量時(shí),必須認(rèn)識(shí)到另一種類型的“不良副反應(yīng)”,涉及pH電極系統(tǒng)。
Tris緩沖液的化學(xué)和物理特性對(duì)pH值的影響
常用于生理測(cè)量(pH7至7.5)的pH范圍內(nèi)的tris沒有大的緩沖能力。因此,在使用tris緩沖液控制樣品pH值時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎行事。tris相當(dāng)大的溫度系數(shù)(-0.028pH/°C)也值得考慮。例如,如果使用tris緩沖液對(duì)儀表進(jìn)行標(biāo)定,并且tris溫度為20°C,則使用25°C的pH值會(huì)導(dǎo)致誤差。所以,在使用tris進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)必須使用溫度pH相關(guān)性。當(dāng)使用tris控制樣品的pH值時(shí),控制程度將取決于樣品溫度。如果樣品溫度變化2°C,pH控制變化約0.06個(gè)pH單位。所需的pH值控制將決定允許的zui大溫度波動(dòng)。
Tris緩沖液的優(yōu)點(diǎn)
① 因?yàn)?span>Tris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;
② 對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris緩沖液的缺點(diǎn)
① 緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;Tris緩沖液應(yīng)使用不含CO2的蒸餾水或去離子水由高純度的tris和HCl制備。
② 溫度效應(yīng)大,溫度變化對(duì)緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃;
③ 易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封;
④ 此緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。