嘌呤霉素Puromycin
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說明：嘌呤霉素是一種由鏈霉菌中獲取的氨基核苷抗生素，它能抑制真核和原核生物的核糖體上發生的肽基轉移。該抗生素可以作用于革蘭氏陽性菌和各種動物、昆蟲細胞。真菌和革蘭氏陰性菌對其不敏感源于對該抗生素的滲透率較低。但是在一些特別的條件下，嘌呤霉素可作用于大腸桿菌。30多年來，嘌呤霉素作為研究蛋白合成的基本工具被廣泛使用。如今，嘌呤霉素出現被限制詞語更可以用來挑選有該抗生素抑制基因的質粒。嘌呤霉素是一種蛋白質合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結構, 能夠同氨基酸結合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點結合，并摻入到生長的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點結合,但是不能參與隨后的任何反應, 因而導致蛋白質合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
英文名：Puromycin, dihydrochloride (Stylomycin, P638) from Streptomyces alboniger 包裝：25mg 類別：生化試劑類
CAS:58-58-2
中文名：嘌呤霉素出現被限制詞語
分子式：C22H31N7O5Cl2
分子量 544.43
Purity >98%
mp: 168℃-178℃
最大吸收波長:275 nm & 267nm
性狀：. 溶于水(50mg/ml)銀杏提取物,黃色針狀結晶,易溶于乙醇,水中不溶。
嘌呤霉素的抗性
Pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰基轉移酶（PAC），被鏈霉菌產生的菌株取代。它位于PUR區，
這里連接了其他決定嘌呤霉素生物合成途徑的基因。
Pac基因的表達阻礙了嘌呤霉素轉染哺乳動物細胞表達它。在某些特定條件下，嘌呤霉素
亦可用來挑選大腸桿菌的質粒中攜帶pac基因的菌株。
篩選條件
嘌呤霉素對大腸桿菌感染性較低，但是在關于哺乳動物細胞的實驗中很用。在轉染實驗中，
它可以替代新霉素系統。
哺乳動物細胞
嘌呤霉素在哺乳動物細胞系反應中的有效濃度范圍從1-10μg/ml。實驗初始，我們建議，
決定實驗中抗生素的最適濃度的方法是首先該濃度可以殺死自身宿主細胞系。
嘌呤霉素可以迅速消滅不含有pac基因的真核細胞。死亡細胞從平板分離，該平板可以用于簡單和初期的轉化克隆細胞鑒定。建議篩選哺乳動物細胞的最適濃度應當低于所列濃度值。
哺乳動物細胞篩選方法
嘌呤霉素常用濃度范圍在1 - 10 μg/ml。等轉化出含有pac基因的質粒后，細胞在含有嘌呤霉
素的普通培養基中增殖，以篩選出穩定轉染子。
1. 在轉染的48小時內，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養基中培養。
注意：細胞在快速增殖時，抗生素作用最明顯。如果細胞濃度過大，抗生素產生的效力也會下
降。細胞最好在他們融合率不高于25%時分裂最佳。
2.每隔3-4天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養基。
3.篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿
主細胞系和轉染篩選效率。
4.轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養皿中，用選擇培養基培養7天。這次
富集培養是為日后的細胞毒性實驗做準備。
儲存條件和穩定性：
嘌呤霉素可在室溫中運輸，收到產品之后應該存放在4℃的環境中。
嘌呤霉素在室溫條件下可存放3個月，4℃條件下保質期一年。為了達到最理想的穩定狀
態和最長的保質期，最好存放于-20°C環境中，保質期為2年。
質量控制和溶解方法：
HPLC控制，產品純度大于98%。溶解方法，5-50 mg/mL in dH2O, store at -20℃。
注意事項：
嘌呤霉素是一個有毒化合物，小心拿放。
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